L’enzyme de restriction Eco31I (BsaI) reconnaît les sites GGTCTC(1/5)^, et sa coupe est optimale à 37°C dans le tampon G (isoschizomères : BsaI, Bso31I, BspTNI).
Marque: Thermo Scientific™ ER0292
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ADN lambda (dcm-) digéré par Eco31I (BsaI), 0,7 % d'agarose, 2 sites de clivage
Les endonucléases de restriction classique sont une grande collection d’enzymes de restriction de haute qualité, optimisées pour fonctionner dans l’un des tampons du système à cinq tampons. En outre, le tampon Tango universel est fourni pour des raisons de commodité dans les digestions doubles. Toutes les enzymes présentent une activité de 100 % dans le tampon et les conditions de réaction recommandés. Pour garantir une performance constante, les tampons de réaction d’enzymes de restriction Thermo Scientific contiennent de la BSA prémélangée, qui améliore la stabilité de nombreuses enzymes et lie les contaminants qui peuvent être présents dans les préparations d’ADN.
5'...G G T C T C (N)1▵...3'
3'...C C A G A G (N)5▵...5'
Conditions pour une activité à 100 % :
Tampon G 1X : Tris-HCl 10 mM (pH 7,5 à 37°C), MgCl2 10 mM, NaCl 50 mM et BSA 0,1 mg/ml
Laissez incuber à 37°C
Tampon de stockage :
Eco31I est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 10 mM (pH 7,5 à 25°C), KCl 200 mM, DTT 1 mM, EDTA 0,1 mM, BSA 0,2 mg/ml et glycérol 50 % (v/v)
Ligature et reclivage :
Après une digestion en excès de 50 fois avec Eco31I, plus de 95 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés et recoupés
Effets de méthylation :
Dam : ne se chevauche jamais ; aucun effet
Dcm : possibilité de chevauchement ; clivage affecté
CpG : possibilité de chevauchement ; clivage affecté
EcoKI : ne se chevauche jamais ; aucun effet
EcoBI : possibilité de chevauchement ; effet non déterminé
Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose :
Au moins 5 U de l’enzyme sont nécessaires pour une digestion complète d’1 μg d’ADN Lambda intégré à de l’agarose en 16 heures
Remarque :
Dosé à l’aide de l’ADN Lambda (dcm-) (#SD0021), l’un des deux sites de reconnaissance Eco31I de l’ADN Lambda étant difficile à cliver. Le clivage Eco31l est affecté par le chevauchement avec la méthylation dcm. Pour éviter la méthylation dcm, utilisez une souche dam,dcm- telle que GM2163 (#M0099). Une faible concentration en sels, une forte concentration en glycérol (> 5 %), un pH > 8,0 ou un large excès d’enzyme peut induire une activité Star. Eco31I clive en aval de son site de reconnaissance et peut générer n’importe quelle saillie de 5’ de base 4 souhaitée. Cette fonctionnalité est utile pour le clonage direct de produits de PCR.
Sensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation dam, non sensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation dam
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