Invitrogen™ Système de synthèse premier brin SuperScript™ IV

Description

Optimisé pour la synthèse d’ADNc premier brin à partir de poly(A)+ purifié ou d’ARN total.

• Le kit comprend la transcriptase inverse (RT) SuperScript IV, un mutant MMLV exclusif qui produit une synthèse robuste et fiable de l’ADNc dans les réactions RT, et l’ezDNase pour éliminer la contamination potentielle de l’ADN génomique
• Le système a été sensiblement amélioré par rapport au système SuperScript III en termes de résistance aux inhibiteurs, de processivité et de vitesse de réaction, tout en conservant tous les avantages du système précédent, notamment une thermostabilité supérieure, une synthèse d’ADNc pleine longueur très efficace et une activité RNase réduite.
• Conçue pour offrir une synthèse rapide, fiable et homogène de l’ADNc, en présence d’inhibiteurs dans un grand nombre d’échantillons, qui empêchent d’autres RT actuellement disponibles d’agir efficacement.
• Contient tous les composants nécessaires aux réactions RT, ainsi qu’un gène de contrôle et des amorces supplémentaires, et offre une flexibilité pour personnaliser la configuration de la RT
• L’ezDNase pour l’élimination de l’ADN génomique est incluse
• L’étape d’élimination de l’ADN génomique simplifiée réduit considérablement la durée de l’intégralité du protocole de transcription inverse, ainsi que la variation éventuelle dans l’expression génétique liée à la perte d’ARN ou aux dommages survenus lors du traitement classique de DNase.
• Idéale lorsque la reproductibilité et la fiabilité sont des préoccupations majeures et lorsque les inhibiteurs de l’échantillon d’ARN risquent d’interférer avec la synthèse d’ADNc, conduisant à des résultats biaisés dans les études d’expression génétique.
• Meilleure résistance à toute une variété d’inhibiteurs qui peuvent interférer avec la synthèse d’ADNc
• Synthèse d’ADNc spécifique et robuste dans une large gamme de types d’échantillons
• Réaction de transcriptase inverse plus rapide qui réduit le temps d’incubation de > 50 min à 15 min avec une étape d’élimination simplifiée de l’ADN génomique

Source d’enzymes
Purifiée à partir d’E. coli exprimant le gène pol de M-MLV, modifiée pour augmenter la thermostabilité et la demi-vie, la processivité, la résistance aux inhibiteurs et pour réduire l’activité RNase H.

Tests de performance et de qualité
Dosages d’endodésoxyribonucléase, d’exodésoxyribonucléase et de ribonucléase ; et rendement et longueur du produit d’ADNc.

Définition de l’unité
Une unité de RT SuperScript IV représente la quantité d’enzyme requise pour incorporer 1 nmol de désoxyribonucléotide dans une substance précipitable à l’acide, en 10 min, à 37°C, en utilisant poly(A) oligo(dT)_12-18 comme modèle / amorce.

Conditions de réaction de l’unité
50 mM de Tris-HCl (pH 8,3), 4 mM de MgCl², 10 mM de DTT, 50 mM de KCl, 0,5 mM de dTTP, 0,4 MBq/ml [³H] de dTTP, 0,4 mM de poly(A) oligo (dT)_12-18 et d’enzyme dans 20 μl pour 10 min à 37°C