Invitrogen™ Calcéine AM, colorants vert et bleu capables de pénétrer dans les cellules

Description

La calcéine AM est un colorant capable de pénétrer dans les cellules fréquemment utilisé dans la recherche en biologie cellulaire. Elle est dérivée de la calcéine, un colorant fluorescent qui présente une fluorescence vert vif lorsqu’il se lie aux ions calcium libres intracellulaires. La calcéine AM est un composé non fluorescent qui peut pénétrer dans la membrane cellulaire en raison de ses propriétés lipophiles. Une fois à l’intérieur de la cellule, elle est clivée par les estérases intracellulaires, produisant une molécule de calcéine fluorescente. Cette conversion permet de conserver le colorant dans le cytoplasme ; les cellules en apoptose et les cellules mortes dont les membranes sont compromises ne retiennent pas la calcéine.

La vitalité cellulaire, mesurée par l’activité de l’estérase intracellulaire, est un paramètre reconnu de la santé cellulaire. Les cellules vivantes se distinguent par la présence d’une activité estérasique intracellulaire omniprésente, déterminée par la conversion enzymatique de la calcéine AM, capable de pénétrer dans les cellules et pratiquement non fluorescente, en calcéine intensément fluorescente verte (ex./ém. 494/517 nm) ou bleue (ex./ém. 360/449 nm). Les cellules en apoptose et les cellules mortes dont la membrane cellulaire est compromise ne retiennent pas la calcéine.

Les dérivés de l’ester d’acétoxyméthyle (AM) des indicateurs fluorescents constituent l’un des groupes de composés les plus utiles pour l’étude des cellules vivantes. Une fois à l’intérieur de la cellule, les groupes de blocage lipophiles sont clivés par des estérases non spécifiques, ce qui entraîne une forme chargée qui est conservée dans les cellules dans une plus grande mesure que son composé parent.

En plus des tests de viabilité des cellules, la calcéine AM est également utilisée pour étudier les processus de migration cellulaire, d’adhésion cellulaire et d’absorption cellulaire. Ses propriétés de fluorescence en font un outil polyvalent pour diverses applications dans la recherche en biologie cellulaire.

Application de la calcéine non AM, colorant incapable de pénétrer dans les cellules :

La calcéine AM nécessite le clivage par des estérases de l’ester acétoxyméthyle (AM) pour devenir fluorescent. Les liposomes n’ont pas d’estérase à moins qu’ils ne soient spécifiquement construits pour inclure l’enzyme. La forme soluble dans l’eau de la calcéine non AM (réf. catalogue C481) ne nécessite pas de clivage par des estérases pour être fluorescente.

Ce fluorophore vert polyvalent est un imperméable cellulaire et est couramment utilisé pour le traçage cellulaire et pour les études d’endocytose et de jonctions lacunaires

Caractéristiques de la calcéine AM, colorant capable de pénétrer dans les cellules :

• Pénètre les cellules—La calcéine AM est capable de pénétrer dans les cellules, ce qui signifie qu’elle peut traverser la membrane cellulaire et pénétrer dans les cellules vivantes. Cette propriété permet aux chercheurs de marquer et de visualiser les structures et les processus intracellulaires.
• Non toxique—La calcéine AM est non toxique pour les cellules et n’affecte pas de manière significative la fonction ou le métabolisme cellulaire.
• Clivage par estérases—Une fois à l’intérieur de la cellule, le groupe d’ester acétoxyméthyle (AM) de la calcéine AM est clivé par des estérases intracellulaires, entraînant la formation de calcéine. Ce processus de clivage active la fluorescence de la calcéine, ce qui permet une détection et une visualisation faciles.
• Répartition uniforme—En pénétrant dans les cellules vivantes, la calcéine AM se répartit uniformément dans l’ensemble du cytoplasme et du noyau. Cette répartition égale permet une évaluation et une visualisation précises des processus cellulaires.
• Stabilité—La calcéine AM est relativement stable à l’intérieur des cellules et peut être utilisée pour des expériences d’imagerie à long terme sans photoblanchiment significatif.
• Fluorogène—La calcéine AM est un composé non fluorescent, mais une fois à l’intérieur de la cellule, elle est clivée par des estérases intracellulaires, ce qui entraîne la formation de calcéine fluorescente.
• Fluorescence vive et stable—La calcéine présente une fluorescence vert ou bleu vif lorsqu’elle se lie aux ions calcium libres intracellulaires ou à d’autres cibles. La fluorescence résultante est stable, ce qui permet une imagerie et une analyse à long terme.

Application de la calcéine AM, colorant capable de pénétrer dans les cellules :

La calcéine AM peut être utilisée dans diverses applications, notamment les analyses de viabilité des cellules, les études de migration et d’infestation de cellules, l’imagerie calcique intracellulaire, le marquage et le traçage des cellules, la microscopie à fluorescence et la cytométrie en flux.

• Viabilité des cellules—La calcéine AM est fréquemment utilisée pour évaluer la viabilité et la cytotoxicité des cellules. Les cellules vivantes dont la membrane est intacte peuvent absorber la calcéine AM, qui est ensuite clivée par des estérases intracellulaires pour produire de la calcéine fluorescente. L’intensité de la fluorescence de la calcéine peut être mesurée afin de déterminer la viabilité des cellules.
• Migration cellulaire—La calcéine AM peut être utilisée pour suivre et visualiser la migration cellulaire. En marquant les cellules avec la calcine AM, leur mouvement et leur migration peuvent être surveillés au fil du temps en utilisant la microscopie à fluorescence. Ceci est particulièrement utile dans l’étude de processus tels que la cicatrisation des plaies, les métastases et le transport cellulaire.
• Adhésion cellulaire—La calcéine AM peut être utilisée pour étudier l’adhésion cellulaire et les interactions entre cellules et substrats. En marquant les cellules avec la calcéine AM et en les cultivant sur divers substrats, les propriétés d’adhésion des cellules peuvent être évaluées. Les changements dans l’intensité de la fluorescence peuvent indiquer des différences dans l’adhésion cellulaire.
• Absorption cellulaire—La calcéine AM peut être utilisée pour étudier les processus d’absorption cellulaire. En marquant des molécules ou des nanoparticules avec la calcéine AM, leur absorption par les cellules peut être suivie et analysée. Cela est utile pour étudier les mécanismes de diffusion des médicaments et pour comprendre les voies d’absorption cellulaire.
• Mesures du pH intracellulaire—La calcéine AM a été utilisée comme colorant sensible au pH pour mesurer les variations du pH intracellulaire. Les propriétés de fluorescence de la calcéine peuvent être modulées par le pH, ce qui permet aux chercheurs de surveiller les changements de pH à l’intérieur des cellules.

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