Ultrafiltration : élution rapide et efficace des protéines des gels de polyacrylamide
L’ultrafiltration est une technique basée sur la séparation membranaire qui a été appliquée à la séparation de petites molécules dissoutes. Lorsqu’une force, comme la force centrifuge, est appliquée à de telles molécules, celles qui sont plus petites que la taille des pores de la membrane la traverseront tandis que les molécules plus grosses seront retenues.
Les dispositifs centrifuges Nanosep™ ont été conçus pour l’application de cette technique dans la manipulation des protéines et de l’ADN. Ils sont équipés de membranes spécialement préparées ayant différents seuils de poids moléculaire (MWCO). Le choix du bon MWCO (voir tableau 1) permet une concentration efficace des solutions de protéines. Il permet également d’éliminer rapidement et efficacement le sel, un échange de tampon et un fractionnement des protéines. Ces dispositifs offrent ainsi une alternative rapide et peu coûteuse aux méthodes couramment utilisées pour l’élution et la concentration des protéines qui ont été séparées sur des gels de polyacrylamide. En raison de sa nature douce, cette méthode d’élution est particulièrement efficace pour les molécules biologiquement actives et les préparations de protéines complexes.
"La quantité de gels de polyacrylamide de départ est le facteur limitant pour une récupération élevée des protéines."
La réduction de la quantité de gels de polyacrylamide augmente le rendement en protéines éluées, mais réduit également considérablement le temps de centrifugation, un facteur à prendre en compte lors de l’élution de protéines biologiquement actives. Cette méthode a été appliquée avec succès à l’élution de mélanges de protéines enzymatiquement actives dans leur état natif, dans des conditions non dénaturantes et dénaturantes, sans perte significative d’activité. La quantité de dodécylsulfate de sodium (SDS) dans le tampon d’élution peut être déterminée empiriquement pour augmenter la récupération tout en préservant l’activité biologique. Par conséquent, l’ultrafiltration est une méthode rapide et douce, idéale pour l’élution de protéines biologiquement actives (figure 1).
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