Ce kit utilise la transcriptase inverse RevertAid présentant une activité RNase H plus faible par rapport à la transcriptase inverse d'AMV. L'inhibiteur RNase RiboLock recombinant, fourni avec le kit, protège efficacement le modèle d'ARN de la dégradation. Totalement compatible avec la réaction de transcription inverse, puisqu’il maintient l’activité à des températures allant jusqu’à 55°C. L’oligo(dT)18 se lie par annelage, de manière sélective, à queue poly(A) de l’ARNm. Les amorces hexamères aléatoires ne nécessitent pas la présence de poly(A). En conséquence, elles peuvent être utilisées pour la transcription des régions des extrémités 5’ de l’ARNm ou la synthèse d’ADNc en utilisant l’ARN sans queue poly(A) (par exemple, les micro-ARN). Les amorces spécifiques aux gènes peuvent aussi être utilisées avec les kits. Le premier brin de l'ADNc peut directement être utilisé à titre de modèle dans la PCR (voir le protocole RT-PCR), la PCR en temps réel ou dans la synthèse de l'ADNc deuxième brin (voir le protocole).
Le kit de synthèse d’ADNc premier brin Thermo Scientific RevertAid est un système complet permettant une synthèse efficace de l’ADNc monocaténaire à partir de modèles d’ARN. Le kit convient à la synthèse d’ADNc jusqu’à 13 kb. L’inhibiteur d’ARNase RiboLock fourni avec le kit protège efficacement les modèles d’ARN de la dégradation. Le kit RevertAid de synthèse d’ADNc premier brin est fourni avec l’amorce oligo(dT)18 ainsi que les amorces hexamères aléatoires. L’amorce oligo(dT)18 hybride de façon sélective sur la queue poly(A) de l’ARNm. Les amorces hexamères aléatoires ne nécessitent pas la présence de la queue poly(A) ; par conséquent, elles peuvent être utilisées pour la transcription de régions à extrémité de 5’ de synthèse d’ARNm ou ADNc d’espèces d’ARN privées de queue poly(A) (par exemple, les micro-ARN). Les amorces spécifiques aux gènes peuvent aussi être utilisées avec le kit. Points clés • ADNc premier brin pleine longueur jusqu’à 13 kb • Température de réaction optimale : 42°C • Kit complet : tous les composants pour la réaction RT sont inclus Applications • Synthèse d’ADNc de premier brin pour RT-PCR et RT-qPCR • Construction de bibliothèques d’ADNc pleine longueur • Synthèse d’ARN antisens Comprend Le kit de synthèse d’ADNc premier brin RevertAid contient la transcriptase inverse RevertAid, l’inhibiteur d’ARNase RiboLock, le tampon de réaction 5X, le mélange dNTP, l’amorce hexamère aléatoire, de l’ARN de GAPDH de contrôle, l’amorce de GAPDH sens à 10 μM, l’amorce de GAPDH antisens à 10 μM et de l’eau sans nucléase. Le kit de RT RevertAid contient la transcriptase inverse RevertAid, l’inhibiteur de la RNase RiboLock, un tampon de réaction 5X, un mélange dNTP, une amorce d’hexamère aléatoire et une eau sans nucléase.
Danger : non >Contrôle qualité : le kit est testé fonctionnellement dans la RT-PCR en utilisant 100 fg d’amorces de contrôle GAPDH ARN et GAPDH et a généré un produit de 496 bp visible sur du gel d’agarose après coloration au bromure d’éthidium. > Conservation : -20°C
Synthèse d’ADNc premier brin pour la RT-PCR et la RT-PCR en temps réel (1, 2) ; Construction de banques d’ADNc pleine longueur ; Génération de sondes pour l’hybridation ; Synthèse de l’ARN antisens.
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