ADN lambda digéré avec Sall, 0,7 % d’agarose, 2 sites de clivage
Les endonucléases de restriction classique sont une grande collection d’enzymes de restriction de haute qualité, optimisées pour fonctionner dans l’un des tampons du système à cinq tampons. En outre, le tampon Tango universel est fourni pour des raisons de commodité dans les digestions doubles. Toutes les enzymes présentent une activité de 100 % dans le tampon et les conditions de réaction recommandés. Pour garantir une performance constante, les tampons de réaction d’enzymes de restriction Thermo Scientific contiennent de la BSA prémélangée, qui améliore la stabilité de nombreuses enzymes et lie les contaminants qui peuvent être présents dans les préparations d’ADN.
5'...G▵T C G A C...3'
3'...C A G C T▵G...5'
Conditions pour une activité à 100 %
Tampon O 1X : Tris-HCl 50 mM (pH 7,5 à 37°C), MgCl2 10 mM, NaCl 100 mM et BSA 0,1 mg/ml
Laissez incuber à 37°C
Tampon de stockage
Sall est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 à 25°C), KCl 100 mM, DTT 1 mM, EDTA 0,1 mM, BSA 0,2 mg/ml et glycérol 50 % (v/v)
Ligature et clivage
Après une digestion en excès de 50 fois avec Sall, plus de 95 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés et recoupés
Effets de méthylation
Dam : ne se chevauche jamais ; aucun effet
Dcm : ne se chevauche jamais — aucun effet
CpG : se chevauche complètement ; blocage
EcoKI : ne se chevauche jamais ; aucun effet
EcoBI : ne se chevauche jamais — aucun effet
Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose
Au moins 5 unités de l’enzyme sont nécessaires pour la digestion complète d’1 μg d’ADN Lambda intégré à de l’agarose en 16 heures
Extrémités compatibles
Eco88I, SmoI, XhoI
Remarque :
Une faible concentration en sels, une forte concentration en glycérol (> 5 %), un pH > 8,0 ou un large excès d’enzyme peut induire une activité Star. Les formes surenroulées de pBR322 et pUC requièrent une digestion en excès de 10 fois avec SalI pour obtenir une digestion complète. L’incubation à 25°C se traduit par une activité de 50 à 75 %.
Sensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation dam, non sensible à la méthylation dcm, non sensible à la méthylation dam, non sensible à la méthylation dcm
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