Thermo Scientific™ Pierce™ S-Nitrosylation Western Blot Kit and HENS Buffer

Description

Le kit de transfert Western S-Nitrosylation Pierce contient un tampon de lyse/réaction cellulaire, un agent bloquant réactif au sulfhydryle, un agent réducteur, un agent de marquage et un anticorps anti-TMT pour marquer 40 échantillons (100 μg chacun). Comme pour les tests traditionnels de commutation de la S-nitrosylation, les cystéines non modifiées sont bloquées par un composé réactif au sulfhydryle. Les cystéines S-nitrosylées sont ensuite réduites de manière sélective avec l’ascorbate dans le tampon HENS pour un marquage avec les réactifs iodoTMTzéro, qui se lient de façon irréversible au thiol de cystéine qui a été S-nitrosylé. La détection des protéines modifiées par le réactif TMT est facilitée par un anticorps antiTMT.

La S-nitrosylation est une modification post-translationnelle qui régule de nombreux processus, notamment la prolifération cellulaire, l’apoptose, la relaxation musculaire lisse, la libération de neurotransmetteurs et la différenciation. Pendant la S-nitrosylation, les radicaux d’oxyde nitrique réagissent avec les thiols de cystéine pour produire un adduit S-NO altérant l’activité protéique.

Kit de transfert Western S-Nitrosylation Pierce
Le kit de transfert Western S-Nitrosylation Pierce contient les réactifs nécessaires pour réaliser une version modifiée de l’essai traditionnel de commutation de la S-nitrosylation, y compris un réactif bloquant la cystéine, un agent réducteur, un tampon de réaction, un réactif de marquage iodoTMT et un anticorps anti-TMT. Le marquage est réalisé en utilisant le réactif non biologique iodoTMT en lieu et place de la biotine-HPDP, ce qui permet de réduire le signal de fond lors de la détection par transfert Western. En plus de la détection des protéines S-nitrosylées par transfert Western, une résine anti-TMT immobilisée peut être utilisée pour enrichir de manière sélective les protéines / peptides S-nitrosylés marqués avec des réactifs iodoTMT. Ce flux de travail permet la cartographie de site de la S-nitrosylation et la quantification multiplexée à l’aide de la spectrométrie de masse.

Les caractéristiques du kit de transfert Western S-Nitrosylation Pierce sont les suivantes :
• Spécifique : les réactions de marquage optimisées commutent les modifications post-translationnelles de la S-nitrosocystéine avec le réactif iodoTMT pour une détection facile par transfert Western à l’aide d’un anticorps anti-TMT
• Meilleur rapport signal-bruit : utilise un réactif iodoTMT non biologique pour le marquage au lieu de la biotine-HPDP, ce qui réduit le bruit de fond lors de la détection par transfert Western
• Compatible avec le flux de travaux : la méthode de marquage est compatible avec d’autres méthodes d’analyse, y compris l’enrichissement via une résine anti-TMT et l’analyse quantitative multiplexée par spectrométrie de masse
• Pratique : tous les réactifs nécessaires sont inclus dans un kit

Tampon HENS
Le tampon HENS est composé de 100 mM HEPES (pH 7,8), 1 mM EDTA, 0,1 mM Neocuproine et 1 % SDS. Il s’agit d’un tampon de lyse cellulaire destiné à être utilisé avec le kit de transfert Western S-Nitrosylation Pierce, qui permet une détection sensible des modifications post-translationnelles de la protéine S-nitrosocystéine dans un kit complet et facile à utiliser.