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Kit d’expression Multi-Copy Pichia
Le kit d’expression multi-copies Pichia contient les vecteurs pPIC3.5K, pPIC9K et pAO815 pour la production et la sélection de souches Pichia qui contiennent plusieurs copies du gène concerné.
Marque: Invitrogen K175001
Code nomenclature Nacres: NA.54
Informations supplémentaires : Poids : 0.02000kg
Description
- Le kit d’expression multi-copies Pichia contient les vecteurs pPIC3.5K, pPIC9K et pAO815 pour la production et la sélection de souches Pichia qui contiennent plusieurs copies du gène concerné.
- Dans de nombreux cas, l’augmentation du nombre de copies a entraîné une augmentation des niveaux d’expression.
- Ces vecteurs sont également disponibles séparément.
pPIC9K et pPIC3.5K
- Les vecteurs pPIC9K et pPIC3.5K portent le gène de résistance à la kanamycine qui confère une résistance au réactif Geneticin™ dans Pichia.
- La génération spontanée de plusieurs événements d’insertion peut être identifiée par la résistance à des niveaux accrus de réactif Geneticin™.
- Les transformants Pichia sont sélectionnés sur un milieu déficient en histidine et sélectionnés en fonction de leur niveau de résistance au réactif Geneticin™.
- La capacité de croître à de fortes concentrations de Geneticin™ indique que de multiples copies du gène de résistance à la kanamycine et du gène d’intérêt sont intégrées au génome.
- Le vecteur pPIC9K dirige la sécrétion des protéines exprimées alors que les protéines exprimées à partir de pPIC3.5K restent intracellulaires.
pAO815
- pAO815 est un vecteur d’expression Pichia conçu pour cloner plusieurs copies d’un gène dans un seul vecteur.
- Le vecteur contient un site Bgl II en amont du gène 5´ AOX1 et un site BamH I unique en aval du signal de terminaison de transcription 3´ AOX1 (TT).
- Quatre étapes sont nécessaires pour générer plusieurs copies du gène d’intérêt :
- 1. Le gène est cloné dans le site EcoR I unique du vecteur.
- 2. La construction est digérée avec du BamH I et du Bgl II pour libérer la “cassette d’expression” qui contient le promoteur AOX1, le gène concerné et le 3´ AOX1 TT.
- 3. Les concatémères de la cassette d’expression sont générés par ligature in vitro.
- 4. Les copies multiples sont réinsérées dans le vecteur pAO815 et transformées en Pichia.
Spécification
Ampicilline (AmpR), gentamicine (GmR) | |
Le kit d’expression Multi-Copy Pichia inclut 20 µg de chacun des vecteurs pPIC3.5K, pPIC9K et pAO815, des souches de Pichia pastoris GS115 (his4), KM71 (arg4 his4 aox1::ARG4), une souche de contrôle GS115 albumine, une souche de contrôle GS115 β-gal, un kit de transformation de sphéroplastes et 2 µg de chaque amorce de séquençage 5´ AOX1, 3´ AOX1 et à facteur α. Les vecteurs pP1C9K, pPIC3.5K et pAO815 sont également disponibles séparément. Conserver les vecteurs et amorces à -20°C. Conserver les souches à température ambiante. La stabilité de tous les composants est garantie pendant 6 mois lorsqu’ils sont correctement conservés. |
|
Cellules de levure | |
AOX1 | |
pPIC | |
Levures | |
Kit d’expression | |
1 kit |
KM71 | |
Enzyme de restriction / MCS | |
Kit | |
P. pastoris | |
Expression à base de cellules | |
Expression de protéines | |
Non marqué | |
Ampicilline (AmpR), gentamicine (GmR) |
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.