Invitrogen™ Réactifs Amplex™ Red et Amplex™ UltraRed

Description

Les réactifs Amplex Red et Amplex UltraRed sont des sondes fluorescentes très sensibles et stables pour la détection du peroxyde d’oxygène (H₂O₂) et des substrats fluorogènes idéaux pour la peroxydase. Ces réactifs peuvent être utilisés pour effectuer des tests basés sur des solutions afin de détecter l’activité de l’H₂O₂ libéré à partir d’échantillons biologiques ou dans des applications ELISA basées sur le HRP. Le réactif Amplex UltraRed est une version améliorée d’Amplex Red qui est plus vive et plus sensible à la peroxydase avec une sensibilité au pH inférieure par rapport au réactif Amplex Red.

En présence de peroxydase de raifort (HRP), les réactifs Amplex Red et UltraRed réagissent dans une stochiométrie de 1:1 avec l’H₂O₂ pour produire de la résorufine hautement fluorescente, fortement absorbante (ex./ém. ∼570/585 nm) ou Amplex UltroxRed (ex./ém. ∼568/581 nm), respectivement. Ces produits de réaction oxydés ont une large émission rouge avec peu d’interférence de l’autofluorescence bleue et verte que l’on retrouve dans la plupart des échantillons biologiques. Étant donné que l’H₂O₂ est produit dans de nombreuses réactions enzymatiques différentes, les réactifs Amplex Red et Amplex UltraRed couplés à la HRP peuvent être utilisés pour détecter l’activité de plusieurs enzymes différentes. Ces réactifs sont également utilisés pour détecter l’H₂O₂ libéré par les échantillons biologiques, y compris les cellules et les mitochondries isolées.

Caractéristiques du réactif Amplex Red :
• Détection sensible et rapide de l’activité de la HRP ou de l’H₂O₂ pour les tests basés sur des solutions et les ELISA
• Détection de l’H₂O₂ produite dans de nombreuses réactions enzymatiques différentes
•Mesure par fluorescence ou par absorbance, permettant une détection fluorogénique ou chromogénique

Le réactif Amplex Red a été utilisé pour développer une variété de nouveaux tests fluorogènes et chromogéniques pour les enzymes qui produisent du peroxyde d’oxygène. Lorsqu’ils sont associés à de la peroxydase de raifort, ces tests qui génèrent de l’H₂O₂ permettent la quantification ultrasensible d’un éventail varié d’analytes, y compris du glucose, du galactose, du cholestérol, de l’acide glutémique, de la xanthine (ou de l’hypoxanthine), de l’acide urique, de la choline et de l’acétylcholine.

Notre réactif Amplex UltraRed offre une fluorescence plus vive et une sensibilité améliorée pour chaque mole dans les tests des enzymes peroxydases ou des enzymes couplés à des peroxydases par rapport à Amplex Red. Le réactif Amplex UltraRed est également moins sensible au pH acide et présente une meilleure stabilité en présence de peroxyde d’hydrogène H₂O₂ ou de thiols comme le dithiothréitol (DTT). Pour les applications ELISA basées sur la HRP, il procure une sensibilité au moins deux fois supérieure à celle d’Amplex Red.

Avantages du réactif Amplex UltraRed par rapport à Amplex Red :
• Signaux plus vifs et sensibilité accrue pour l’activité de la HRP et de l’H₂O₂
• Moins sensible au pH acide
• Amélioration de la stabilité en présence d’H₂O₂ ou de thiols tels que le DTT

Les produits de réaction Amplex Red et Amplex UltraRed, la résorufine et Amplex UltroxRed, présentent des coefficients d’expiration élevés de sorte qu’ils peuvent être mesurés par fluorométrie ou spectrophotométrie avec absorbance à ∼560 nm, offrant une flexibilité dans la détection de l’H₂O₂, divers tests enzymatiques et tests ELISA basés sur l’HRP.

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