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Invitrogen™ GeneRacer™ Kit with SuperScript™ III RT and TOPO TA Cloning™ Kit for Sequencing
Description
Le kit GeneRacer permet d’obtenir des extrémités 5’ et 3’ d’ADNc de pleine longueur en utilisant le séquençage d’ADNc connu à partir des marqueurs de séquence exprimée, de l’ADNc soustrait, de l’affichage différentiel ou du screening de la bibliothèque. Les produits RACE PCR peuvent faire l’objet d’un clonage rapide et facile à l’aide du kit de clonage Zero Blunt TOPO PCR pour le séquençage (produits PCR aux extrémités franches) ou du TOPO TA Cloning pour le kit de séquençage (produits PCR avec des saillies A de 3’). À l’aide des protocoles fournis, les extrémités d’ADNc de transcripts rares (30 copies/cellule) et longs (9 kb) peuvent être amplifiées et mises en séquence à partir de 1 μg d’ARN total.
- Générer l’ADNc à partir de transcripts faisant au moins 10 kb de longueur
- Obtenir une extrémité 5’ de pleine longueur pour des transcripts rares à moins de 30 copies par cellule
- Cloner des extrémités 5’ et 3’ de pleine longueur pour créer une séquence d’ADNc complète
Clonage, PCR et PCR en temps réel, transcription inverse, bibliothèques d’ADNc et construction d’une bibliothèque
Informations sur la commande
Conditions d’expédition : Glace carbonique
Spécification
Spécification
| Souche bactérienne ou de levures | TOP10 |
| Méthode de clonage | TOPO TA |
| Contenu et stockage | Conserver chaque module comme indiqué : Module GeneRacer™ (-20°C) : • 2 × 1,5 ml d’eau stérile • 24 µl de RNaseOut™ • 6 µl chacun de phosphatase intestinale de veau (CIP), tampon CIP, pyrophosphatase acide du tabac (TAP), tampon TAP 10X, RNA ligase T4, tampon RNA ligase T4 10X et 10 mM d’ATP • 6 × 250 ng d’ARN GeneRacer™ Oligo • 2 × 1 ml de phénol / chloroforme • 36 µl de glycogène de moule • 200 µl d’acétate de sodium (3 M) • 225 µl chacun d’amorce GeneRacer™ 5′, amorce nichée 5′, amorce 3′ et amorce nichée 3′ • 20 µl d’ARN total HeLa de contrôle (500 ng/µl) • 15 µl chacun d’amorce de contrôle A et d’amorce de contrôle B.1 Module SuperScript™ III RT (-20°C) • 6 µl de transcriptase inverse SuperScript™ III (200 U/µl) • 24 µl de tampon premier brin 5X • 15 µl de DTT (0,1 M) • 6 µl de RNase H (2 U/µl) • 6 µl d’amorces aléatoires (100 ng/µl) • 6 µl d’amorce GeneRacer™ Oligo dT (900 ng/µl) • 6 µl de mélange dNTP (10 mM chacun) 10 S.N.A.P.™ Colonnes (température ambiante) Kit TOPO TA Cloning™ pour le séquençage (-20°C) • Réactifs suffisants et E. coli chimiquement compétentes One Shot™ TOP10 (conserver à -80°C) pour cloner 10 produits PCR GeneRacer™ ; module GeneRacer (-20°C), module SuperScript III RT (-20°C), E. coli compétentes (conserver à -80°C), S.N.A.P. Colonnes (température ambiante), kit TOPO TA Cloning pour séquençage (-20°C) |
| Format | Kit |
| À utiliser avec (application) | Transcription inverse |
| Comprend | Module GeneRacer : 2 x 1,5 ml d’eau stérile, 24 μl de RNaseOut, 6 μl chacun de phosphatase intestinale de veau (CIP), tampon CIP, pyrophosphatase acide du tabac (TAP), tampon TAP 10X, RNA ligase T4, tampon RNA ligase T4 10X et 10 mM ATP, 6 x 250 ng d’ARN GeneRacer Oligo, 2 x 1 ml de phénol / chloroforme, 36 μl de glycogène de moule, 200 μl d’acétate de sodium (3 M), 225 μl chacun d’amorce GeneRacer 5', amorces nichées 5', amorces 3' et amorce nichée 3', 20 μl d’ARN total HeLa Control (500 ng / μl), 15 μl chacun d’une amorce de contrôle A et d’une amorce de contrôle B.1 ; module SuperScript III RT : 6 μl de transcriptase inverse SuperScript III (200 U / μl), 24 μl de tampon premier brin 5X, 15 μl de DTT (0,1 M), 6 μl de RNase H (2 U / μl), 6 μl amorces aléatoires (100 ng / μl), 6 μl d’amorce GeneRacer Oligo dT (900 ng / μl), 6 μl de mélange dNTP (10 mM chacun), 10 colonnes S.N.A.P., kit de clonage TOPO TA pour séquençage (-20°C), réactifs en quantité suffisante et E. coli chimiquement compétente One Shot TOP10 |
| Gamme de produits | GeneRacer, SuperScript, Clonage TA, TOPO |
| Type de produit | Kit de clonage |
| Quantité | 1 kit |
| Vecteur | pCR4-TOPO TA |
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
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