Invitrogen™ pENTR™/TEV/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli

• Les produits PCR à extrémités franches clonent directionnellement dans le vecteur d’entrée pENTR / TEV / D-TOPO à une efficacité supérieure à 90 % et incluent le site de clivage dépendant de la protéase TEV pour l’élimination des marqueurs d’extrémité N-terminale des protéines exprimées
• Les gènes clonés font rapidement la navette entre de multiples systèmes de vecteurs
• Des performances fiables
• Pour accéder au système Gateway, amplifier par PCR le gène d’intérêt et ajouter le produit directement au vecteur pENTR / SD / D-TOPO chargé de la topoisomérase fournie. Incuber 5 minutes et transformer les cellules E. coli compétentes fournies
• Les clones d’entrée Gateway ainsi obtenus et contenant les sites attL sont prêts pour une recombinaison efficace
• Le vecteur pENTR / TEV / D-TOPO optimisé comprend le site de reconnaissance du virus de la gravure du tabac (TEV) pour le clivage dépendant de la protéase du marqueur d’extrémité N-terminale de la protéine recombinante
• Le vecteur comprend des sites de séquençage d’amorces M13 et T7 et des sites de recombinaison attL flanquant le site d’insertion du produit PCR, permettant ainsi aux clones d’être facilement vérifiés par séquence et recombinés dans le choix des vecteurs
• Un gène de résistance la kanamycine et une origine pUC sont utilisés pour la sélection et la propagation en nombre élevé de copies dans E. coli
• Une saillie à quatre bases sur les paires de vecteurs avec une séquence à quatre bases conçue dans l’amorce sens utilisée dans la réaction PCR afin de fournir de la directionnalité à la réaction de ligature à la topoisomérase

Clonage, clonage Gateway