Invitrogen™ Kit de clonage pENTR™ / D-TOPO™, avec E. coli chimiquement compétents One Shot™ TOP10

Description

• Les produits PCR à extrémités franches clonent directionnellement avec une efficacité supérieure à 90 %, sans nécessiter de ligase, de procédures post-PCR ou d’enzymes de restriction
• Les gènes clonés font rapidement la navette entre de multiples systèmes de vecteurs
• Des performances fiables
• Vecteur de clonage directionnel pour l’entrée dans le système Gateway
• Pour accéder au système Gateway, amplifier par PCR le gène d’intérêt et ajouter le produit directement au vecteur pENTR / SD / D-TOPO chargé de la topoisomérase fournie. Incuber 5 minutes et transformer les cellules E. coli compétentes fournies
• Les clones d’entrée Gateway ainsi obtenus et contenant les sites attL sont prêts pour une recombinaison efficace avec les vecteurs de destination Gateway de choix
• Le vecteur pENTR / D-TOPO comprend des sites de séquençage d’amorces M13 et T7 et des sites de recombinaison attL flanquant le site d’insertion du produit PCR, permettant ainsi aux clones d’être facilement vérifiés par séquence et recombinés dans le choix des vecteurs de destination Gateway contenant l’attR
• Un gène de résistance à la kanamycine et une origine pUC sont utilisés pour la sélection et la propagation en nombre élevé de copies dans E. coli
• Une saillie à quatre bases sur les paires de vecteurs avec une séquence à quatre bases conçue dans l’amorce sens utilisée dans la réaction PCR afin de fournir de la directionnalité à la réaction de ligature à la topoisomérase
• Contourne les limites du clonage médié par restriction, en permettant d’accéder à pratiquement tous les systèmes d’expression dans une simple réaction de recombinaison Gateway efficace à 99 % et réversible d’à peine une heure
• Déplacer la même séquence d’ADN entre différents vecteurs sans utiliser d’enzymes de restriction, de ligase, d’étapes de sous-clonage, de sélection de colonies innombrables ou de re-séquençage vous permettra d’économiser du temps, de l’argent et des efforts

Clonage, clonage Gateway