Invitrogen™ BaculoDirect™ C-Term Transfection Kit

• Conçu pour inclure des sites attR pour une recombinaison rapide et efficace avec clone d’entrée Gateway
• Le gène d’intérêt est recombiné à partir du clone d’entrée dans l’ADN linéaire BaculoDirect à l’aide d’une réaction LR simple d’une heure
• Le Reaction Mix qui en résulte contient du baculovirus recombinant portant un gène d’intérêt et est utilisé directement pour transfecter des cellules d’insectes
• Élimine le besoin de transformer les bactéries et d’isoler le grand bacmide ou co-transfection d’ADN vecteur de transfert et de baculovirus linéaire dans l’insecte vers des cellules afin de réduire le temps de manipulation
• Le baculovirus purifié peut être isolé en moins d’une semaine

• ADN linéaire Gateway : Conçu pour un clonage rapide avec un clone d’entrée Gateway et expression ultérieure dans les cellules d’insectes Sf9 ou Sf21
• Promoteur de polyédrine fort pour une expression de haut niveau
• Sites R pour une recombinaison efficace avec le vecteur d’entrée Gateway flanqué d’attL
• Gène TK pour sélection négative à l’aide de ganciclovir
• Étiquette V5-His d’extrémité N-terminale pour la détection avec l’anticorps Anti-V5 d’Invitrogen et la purification avec de la résine de chélation au nickel (ADN linéaire BaculoDirect d’extrémité N-terminale)
• Site de clivage de la protéase TEV pour l’élimination de l’étiquette V5-His suivant purification (ADN linéaire BaculoDirect d’extrémité N-terminale)
• Étiquette V5-His C-terminal pour la détection avec l’anticorps Anti-V5 d’Invitrogen et la purification avec de la résine de chélation au nickel (ADN linéaire BaculoDirect C-terminal)

Production et titration de baculovirus, Clonage, Clonage Gateway, Expression d’insectes, Expression protéique, Protéines, Isolement et analyse