Thermo Scientific™ Uracil-DNA Glycosylase (1 U/μL)

Description

L’uracile-ADN glycosylase (UDG, UNG) catalyse l’hydrolyse de la liaison N-glycosylique entre l’uracile et le sucre, laissant ainsi un site apyrimidinique dans les molécules d’ADN simple ou double brin contenant de l’uracile. L’enzyme ne montre aucune activité sur l’ARN.

• Active dans les tampons Fermentas pour les enzymes de restriction et les polymérases thermophiles
• Source : Cellules d’E. coli K12
• Poids moléculaire : Monomère 25,6 kDa

• L’absence d’endodésoxyribonucléases, d’exodésoxyribonucléases, de phosphatases et de ribonucléases a été vérifiée par des tests de qualité appropriés

Source :

• Cellules K12 E. coli

Poids moléculaire :

• Monomère 25,6 kDa

Définition de l’unité d’activité :

• Une unité d’enzyme catalyse la libération d’une nanomole d’uracile à partir d’une matrice d’ADN contenant de l’uracile en 60 min à 37°C

• Tris-HCl 30 mM (pH 7,5), NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, DTT 1 mM, Tween 20 0,05 % (v/v) et glycérol 50 % (v/v)

Tampon de réaction 10X :

• Tris-HCl 200 mM (pH 8,2 à 25°C), EDTA 10 mM, NaCl 100 mM

• Inhibiteurs : Protéine Ugi du phage PBS2 de Bacillus subtilis, protéine p56 du phage phi29 de Bacillus subtilis (7).
• Inactivation par la chaleur à 95°C pendant 10 min. L’activité enzymatique est partiellement restaurée à des températures inférieures à 55°C. Les produits de PCR doivent donc être conservés dans la glace après la PCR et chargés directement sur gel

Recommandées dans les cas suivants :

Contrôle des contaminations lors des PCR (2) ; détection de polymorphisme nucléotidique simple médié par glycosylase (GMPD) (3) ; mutagénèse dirigée (4) ; sonde pour les études des interactions protéine-ADN (5) ; génotypage de SNP ; clonage de produits de PCR (6) ; génération de saillies simple brin sur les produits de PCR et les ADNc.

Remarque :

Les sites abasiques formés dans l’ADN par l’uracile-ADN glycosylase peuvent être ultérieurement clivés par un traitement thermique ou alcalin ou par des endonucléases clivant spécifiquement au niveau des sites abasiques. L’UDG (UNG) est active en présence ou en absence de cations divalents.