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Thermo Scientific™ BplI (5 U/μL)
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Les endonucléases de restriction classique sont une grande collection d’enzymes de restriction de haute qualité, optimisées pour fonctionner dans l’un des tampons du système à cinq tampons. En outre, le tampon Tango universel est fourni pour des raisons de commodité dans les digestions doubles. Toutes les enzymes présentent une activité de 100 % dans le tampon et les conditions de réaction recommandés. Pour garantir une performance constante, les tampons de réaction d’enzymes de restriction Thermo Scientific contiennent de la BSA prémélangée, qui améliore la stabilité de nombreuses enzymes et lie les contaminants qui peuvent être présents dans les préparations d’ADN.
5'...▵ 8(N) G A G (N)5 C T C (N)13▵...3'
3'...▵13(N) C T C (N)5 G A G (N)8 ▵...5'
Conditions pour une activité à 100 % :
- [Tampon Tango™ 1X] + SAM : [Tris-acétate 33 mM (pH 7,9 à 37°C), Mg-acétate 10 mM, K-acétate 66 mM et BSA 0,1 mg/ml] + S-adénosylméthionine 0,05 mM
- Laissez incuber à 37°C
Tampon de stockage :
- BplI est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 10 mM (pH 7,4 à 25°C), KCl 100 mM, DTT 1 mM, EDTA 1 mM, BSA 0,2 mg/ml et glycérol 50 % (v/v)
Ligature et reclivage :
- Après une digestion en excès de 10 fois avec Bpll, plus de 70 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés, mais aucun de ces derniers ne peut être recoupé en raison de la méthylation de la séquence de reconnaissance par cette enzyme
Effets de méthylation :
- Dam : ne se chevauche jamais ; aucun effet
- Dcm : ne se chevauche jamais — aucun effet
- CpG : possibilité de chevauchement ; aucun effet
- EcoKI : ne se chevauche jamais ; aucun effet
- EcoBI : ne se chevauche jamais — aucun effet
Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose :
- Au moins 10 unités de l’enzyme sont nécessaires pour la digestion complète d’1 μg d’ADN lambda intégré à de l’agarose en 16 heures
Remarque :
L’activité de BplI ne nécessite que Mg2+, mais est stimulée par la S-adénosylméthionine. La S-adénosylméthionine 0,05 mM se traduit par une hausse 100 fois plus importante dans l’activité Bpll. Cependant, un clivage complet de certains substrats avec BplI est difficile à obtenir. La concentration de BplI est déterminée par le taux maximal de clivage obtenu, lorsque le schéma de fragmentation observé ne présente aucun changement quand on augmente encore davantage la quantité d’enzyme.
Tekniske data
Tekniske data
| Concentration | 5 U / μl |
| Sensibilité à la méthylation | Non sensible à la méthylation dam, non sensible à la méthylation dcm, non sensible à la méthylation CpG, non sensible à la méthylation dcm, non sensible à la méthylation CpG |
| Enzymes | BplI |
| Tampon compatible | Tampon 10X Tango |
| Sensible à l’inactivation thermique | Oui |
| Température de réaction optimale | 37°C |
| Enzymes de restriction de type IIS | Non |
| Quantité | 100 U |
| Type de produit | Enzyme de restriction |
| Catégorie de recherche | Clonage traditionnel |
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
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