Thermo Scientific™ Exonuclease VII

Description

• L’exonucléase VII est une enzyme simple brin stricte dirigée avec des activités d’exonucléases 5’ → 3’ et 3’ → 5’, ce qui en fait la seule exonucléase bidirectionnelle avec une spécificité à un seul brin. L’exonucléase VII n’a aucune exigence apparente pour les cations divalents, car elle est pleinement active en présence d’EDTA. Les produits de réaction initiale sont des oligonucléotides insolubles dans l’acide qui sont ensuite hydrolysés en forme soluble dans l’acide. Les produits de digestions limitées sont de petits oligomères (dimères à dodécamères).
• Poids moléculaire : sous-unité xseA = 51,8 kDa ; sous-unité xseB = 8,8 kDa\
• Température optimale : 37°C
• PH optimal : 8,0
• Inactivation : 95°C pendant 10 minutes.
• Pureté supérieure à 95 %, comme déterminé par SDS-PAGE. Testé pour détecter les endonucléases contaminantes, les exonucléases double brin et les ribonucléases.
• 50 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 200 mM de NaCl, 0,5 mM d’EDTA, 10 mM de DTT, 50 % de glycérol.
• La réaction (50 µL) contient 50 mM de Tris-HCl (pH 7,9), 50 mM de phosphate de potassium (pH 7,6), 8,3 mM d’EDTA, 10 mM de 2-mercaptoéthanol, de l’ADN dénaturé et l’enzyme.
• Une unité correspond à la quantité d’enzyme nécessaire pour catalyser la conversion de 1 nmol de nucléotide soluble dans l’acide en 30 minutes à 37°C dans des conditions de dosage standard.
• Souche de E.coli contenant des clones surproducteurs codant les grandes (xseA) et les petites (xseB) sous-unités d’exonucléase VII.
• Conditions de réaction typiques (50 µL)
• 70 mM de Tris-HCI, pH 8,0
• 8 mM d’EDTA
• 10 mM de 2-mercaptoéthanol
• 1 µg d’ADN
• 50 µg/mL 0,2 unité
• Exonucléase VII
• Incuber à 37°C pendant 30 minutes. Inactiver l’enzyme en la chauffant à 95°C pendant 10 minutes. Noter que l’exonucléase VII n’est pas inhibée par l’EDTA.
• Un tampon de dilution typique à utiliser avec l’exonucléase VII est composé de 50 mM de Tris, pH 7,9, 1 mM de DTT et 0,5 mg/mL de BSA acétylée.
• Cartographie des positions des introns dans l’ADN génomique.
• Élimination de l’ADN vecteur des inserts avec des queues poly (dA-T).
• Élimination des amorces pour PCR en excédent.
• Élimination des saillies simple brin produites par des endonucléases de restriction.