Invitrogen™ Kit de détection vert de sénescence par cytométrie en flux CellEvent™

Cette sonde à base de fluorescéine contient deux fractions de galactoside, ce qui en fait une cible pour la β-galactosidase. L’activation de la β-galactosidase est couramment utilisée comme biomarqueur pour les cellules sénescentes. Cette enzyme hydrolytique réside dans les lysosomes et convertit les β-galactosides en monosaccharides dans des conditions de pH acide. Le produit clivé enzymatiquement est retenu dans la cellule en raison de la liaison covalente des protéines intracellulaires et émet un signal fluorogène qui a des maxima d’absorption/émission de 490/514 nm.

Les fonctionnalités du kit sont les suivantes :
• Détection fluorescente fiable et rapide des cellules sénescentes
• Plus grande sensibilité que la x-gal colorimétrique traditionnelle
• Le signal fluorescent est bien conservé et détecté à l’aide des ensembles de filtres Alexa Fluor™ 488/FITC standard
• La sonde de sénescence fluorescente— activée par multiplex peut être multiplexée

En raison d’une durée de vie réplicative limitée, le cycle cellulaire des cellules normales s’arrête. Il s’agit de la sénescence cellulaire. Pendant cette phase sénescente, les cellules restent métaboliquement actives sans subir de mort ou de division cellulaire. Elles adoptent un phénotype spécifique avec l’apparition de plusieurs noyaux, une vacuolisation accrue, l’expression de la β-galactosidase dépendante du pH ainsi que l’élargissement et l’extension morphologiques. La sénescence, grâce à divers mécanismes, pourrait jouer un rôle dans la suppression et la progression des tumeurs, le vieillissement et la réparation des tissus.

L’activation de la β-galactosidase est couramment utilisée comme biomarqueur pour les cellules sénescentes. Cette enzyme hydrolytique réside dans les lysosomes et convertit les β-galactosides en monosaccharides dans des conditions de pH acide. L’activité est optimale à pH lysosomal 4, mais les dosages conventionnels mesurent à pH 6. Il a été démontré que l’activité de la β-galactosidase normalisée est deux fois plus élevée dans les cellules sénescentes que dans les cellules pré-sénescentes, quelle que soit la valeur de pH utilisée pour les dosages.

Un substrat colorimétrique pour la β-galactosidase, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (x-gal), a longtemps été utilisé pour détecter l’activité métabolique dans les cellules in vitro. Toutefois, son utilisation est limitée en raison d’un signal incohérent, de la longueur du dosage et de son incapacité de à se multiplexer.

Par conséquent, nous avons développé un substrat fluorescent sensible pour la β-galactosidase qui peut être utilisée pour la détection des cellules sénescentes. La sonde de détection de sénescence CellEvent™ Green est un réactif à base de fluorescéine contenant deux fractions de galactoside, ce qui en fait une cible spécifique de la β-galactosidase. Le produit clivé par enzyme est retenu dans la cellule en raison de la liaison covalente des protéines intracellulaires et émet un signal fluorogène qui a des maxima d’absorption/émission de 490/514 nm.

Le kit de détection de sénescence CellEvent™ Green comporte une sonde de détection de sénescence CellEvent™ Green et un tampon optimisé pour la détection des cellules sénescentes dans des échantillons fixes. Cette sonde peut être multiplexée avec d’autres réactifs fluorescents compatibles avec la fixation du paraformaldéhyde.