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La recherche indépendante indique que l’utilisation de la solution de stabilisation de l’ARN RNAlater pour la conservation des tissus n’affecte pas le résultat des expériences d’analyse d’expression d’ARN ultérieures par comparaison aux autres méthodes de traitement. La solution de stabilisation d’ARN RNAlater™ stabilise et protège l’ARN cellulaire en échantillons de tissu intacts, décongelés, éliminant ainsi le besoin de traiter immédiatement les échantillons tissulaires ou de congeler les échantillons dans de l’azote liquide pour traitement ultérieur. Les fragments de tissus peuvent être récoltés et submergés dans la solution de stabilisation d’ARN RNAlater pour conservation sans compromettre la qualité ou la quantité d’ARN obtenu après l’isolement d’ARN ultérieur.
Efficacité : stabilise l’ARN pendant un jour à 37°C, une semaine à 25°C, un mois à 4°C ou indéfiniment à -20°C
Simplicité : un seul réactif qui désactive immédiatement les RNases et stabilise l’ARN à l’intérieur des tissus ou des cellules
Commodité : il n’est pas nécessaire de congeler les échantillons dans de l’azote liquide ni de se précipiter pour ranger les échantillons dans le congélateur du laboratoire
Mobilité : parfait pour le prélèvement des tissus sur le terrain
Polyvalence : compatible avec de nombreuses procédures d’isolement de l’ARN, notamment la plupart des kits d’isolement de l’ARN
Procédure d’utilisation de la solution de stabilisation d’ARN RNAlater Le tissu disséqué (moins de 0,5 cm dans toutes ses dimensions) est simplement immergé dans approximativement cinq volumes de solution RNAlater à température ambiante. La solution pénètre dans les cellules, stabilisant l’ARN. L’échantillon peut alors être conservé indéfiniment à -20°C (le tissu ne gèle pas), à 4°C jusqu’à un mois ou à 25°C jusqu’à une semaine Pour isoler l’ARN, le tissu est simplement retiré de la solution RNAlater et traité comme s’il venait juste d’être prélevé. La plupart des tissus peuvent être transférés directement à un tampon de lyse et homogénéisés. Les échantillons traités avec la solution RNAlater et congelés par la suite peuvent être broyés avec un mortier et un pilon ou décongelés et traités comme des tissus frais sans se soucier des ruptures de cellules et de la libération d’ARNases puisque les ARNases ont déjà été inactivées. Les cellules peuvent être extraites, puis ajoutées au tampon de lyse ou, dans certains cas, la solution RNAlater peut être ajoutée avec les cellules directement au tampon de lyse. Compatible avec diverses procédures La solution de stabilisation de l’ARN RNAlater est compatible avec les méthodes d’isolement d’ARN en une étape telles que le réactif TRIzol ; avec des méthodes de liaison en verre telles que Qiagen’s RNeasy™ ou le kit Ambion RNAqueous ; avec des méthodes d’extraction acide phénol telles que le kit Ambion ToTALLY RNA™ ; et avec des méthodes qui utilisent la sélection oligo(dT) de l’ARNm, telles que le kit Ambion Poly(A)Purist™.
Applications
La solution de stabilisation de l’ARN RNAlater a été testée sur de nombreux tissus de mammifères, des végétaux, sur les bactéries E. coli, Xenopus, sur des poissons et sur Drosophila.
Protection de l’intégrité de l’ARN dans les tissus riches en ARNases
Prélèvement d’échantillons à différents points dans le temps sans avoir à traiter les échantillons immédiatement à chaque point dans le temps
Archivage des tissus pour de futures microdissections
Submersion de cavités ou d’organes animaux pour stabiliser l’ARN pendant les procédures de dissection longues
Prélèvement d’échantillons dans des lieux dans lesquels l’isolement immédiat de l’ARN n’est pas possible (par ex., les hôpitaux, les sites sur le terrain, la navette spatiale)
Transport d’échantillons sur de la glace ou même à température ambiante si le transport a lieu la nuit
Purification et analyse de l’ADN et de l’ARN, Réactifs et accessoires généraux de purification de l’ARN,Extraction de l’ARN, Isolement de l’ARN total, ARN total des cellules et tissus animaux, Isolement de l’ARNm
