Invitrogen™ Cells-to-cDNA™ II Kit

Description

Le kit Ambion Cells-to-cDNA™ II (brevet en attente) produit de l’ADNc à partir de cellules de mammifères cultivées en moins de deux heures. Aucun isolement de l’ARN requis. Ce kit est idéal pour ceux qui souhaitent effectuer des réactions de transcription inverse sur de petits nombres de cellules, de nombreux échantillons de cellules ou pour les scientifiques qui ne pratiquent pas l’isolement d’ARN.

• Aucune purification d’ARN requise
• Des cellules en culture à l’ADNc en moins de deux heures
• Détectez les messages rares dans une seule cellule
• Idéal pour les laboratoires non équipés pour l’isolement d’ARN

Idéal pour les applications de RT-PCR
Le kit Cells-to-cDNA II (brevet en attente) intègre l’inactivation d’ARNase et le traitement DNase I dans un tampon de lyse cellulaire compatible RT-PCR, éliminant ainsi l’isolement de l’ARN. La plupart des tampons de lyse cellulaire contiennent de puissants dénaturants qui, s’ils sont transportés dans des réactions enzymatiques, inhibent ou inactivent la plupart des enzymes. Si un tampon de lyse sans puissant dénaturant est utilisé, l’ARNase endogène peut rapidement dégrader l’ARN cellulaire. Le kit Cells-to-cDNA II contient un nouveau tampon de lyse cellulaire qui inactive les ARNases endogènes sans compromettre les réactions enzymatiques en aval. Après l’inactivation des ARNases, le lysat cellulaire peut être directement ajouté à une réaction de synthèse de l’ADNc. Cells-to-cDNA II est compatible avec les protocoles RT-PCR en une et deux étapes.
Résultats linéaires quantitatifs et contamination de l’ADN non détectable
Pour illustrer la réponse quantitative et linéaire de Cells-to-cDNA II aux variations du nombre de cellules d’entrée, une expérience RT-PCR quantitative en temps réel a été réalisée à l’aide du système de détection de séquences ABI 7700. Le seuil de cycle de transfert (Ct) par rapport à la concentration cellulaire pour la GAPDH a donné une courbe standard avec une corrélation de 0,99. Ainsi, Cells-to-cDNA II donne des résultats linéaires pour 1 à 10 000 cellules / μl lors d’un dosage RT-PCR en temps réel en deux étapes. Il convient également de noter que le contrôle PCR moins-modèle pour l’expérience GAPDH était négatif, ce qui indique l’élimination complète de l’ADN génomique.
Procédure simple
Le kit est livré avec tout ce dont vous avez besoin pour passer des cellules en culture à l’ADNc prêt pour la PCR en moins de deux heures ; aucune isolation d’ARN n’est requise. Les cellules sont d’abord nettoyées par PBS, puis resuspendues dans le tampon de lyse cellulaire. Un bref chauffage lyse simultanément les cellules et inactive les ARNases. Une digestion par DNase en option est ensuite effectuée pour dégrader l’ADN génomique, suivie d’une étape d’inactivation thermique. Une fraction du lysat cellulaire est ensuite utilisée dans une réaction de transcription inverse avec les réactifs inclus.
Produits accessoires :
l’ADN polymérase SuperTaq™ Thermostable Taq est recommandé et disponible séparément (n° cat. AM2050 et AM2052). Pour une amplification optimale des fragments supérieure à 1 kb, utilisez l’ADN polymérase SuperTaq Plus Thermostable Taq (n° cat. AM2054 et AM2056).

PCR et PCR en temps réel, PCR en temps réel (qPCR), PCR en temps réel directement à partir d’échantillons, transcription inverse, synthèse d’ADNc directe à partir de cellules

Informations sur la commande

Conditions d’expédition : Glace carbonique