Les milieux de culture cellulaire

Quels sont les types de milieux de culture cellulaire ?

Il existe différents types de milieux de culture cellulaire utilisés pour la culture de cellules de mammifères, chacun ayant des formulations et des objectifs différents. Voici quelques exemples couramment utilisés:

1. Le DMEM est un milieu largement utilisé pour la croissance d'une variété de lignées cellulaires de mammifères. Il contient du glucose, des acides aminés, des vitamines et des sels, et peut être complété par du sérum ou d'autres facteurs de croissance selon les besoins. facteurs de croissance selon les besoins.
2. Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium: RPMI 1640 est un autre milieu couramment utilisé pour la culture de cellules de mammifères. Il est conçu pour favoriser la croissance des cellules dérivées des tissus lymphoïdes, tels que les cellules B et les cellules T.
3. Milieu essentiel minimum (MEM): Le MEM est un milieu de base qui contient des nutriments essentiels à la croissance de la plupart des cellules de mammifères, notamment du glucose, des acides aminés, des vitamines et des sels.
4. Milieu F-12 de Ham: Le milieu F-12 de Ham est un milieu riche en nutriments qui contient une variété d'acides aminés et de vitamines. Il est souvent utilisé pour la croissance de cellules qui nécessitent des niveaux élevés de nutriments, telles que les cellules d'hybridomes.
5. Milieu Dulbecco modifié d'Iscove (IMDM): L'IMDM est un milieu spécialisé optimisé pour la croissance des cellules hématopoïétiques, telles que les cellules de la moelle osseuse et les lymphocytes.
6. DMEM/F-12: Le DMEM/F-12 est un milieu hybride qui combine les avantages du DMEM et du milieu Ham's F-12. Il est couramment utilisé pour la culture de divers types de cellules.
7. Milieu pour cellules souches neurales: Le milieu pour cellules souches neurales est un milieu spécialisé optimisé pour la croissance et la maintenance des cellules souches neurales.

Il existe également de nombreux milieux spécialisés, conçus pour des types de cellules et des applications spécifiques. Le choix du milieu dépend des besoins spécifiques de la lignée cellulaire ou de l'application.

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• Milieux de culture pour cellules souches

Suppléments de culture cellulaire

Les suppléments de culture cellulaire sont ajoutés au milieu de culture pour soutenir la croissance, la prolifération et la différenciation des cellules. Les suppléments les plus couramment utilisés sont les suivants :

1. Le sérum bovin fœtal (FBS): Le FBS est le supplément le plus couramment utilisé pour la culture de cellules de mammifères. Il contient un mélange complexe de facteurs de croissance, d'hormones et d'autres nutriments qui favorisent la croissance et la prolifération des cellules.
2. Sérum humain : Le sérum humain peut être utilisé comme alternative au FBS dans certaines applications, telles que la culture de cellules souches.
3. Sérum-albumine bovine (BSA) : la BSA est une protéine qui peut être ajoutée au milieu de culture pour améliorer l'attachement et la croissance des cellules.
4. Insuline : l'insuline est un facteur de croissance qui peut être ajouté au milieu de culture pour favoriser la prolifération cellulaire.
5. Transferrine : la transferrine est une protéine liant le fer qui peut être ajoutée au milieu de culture pour favoriser la croissance et la prolifération des cellules.
6. Facteur de croissance épidermique (EGF) : L'EGF est un facteur de croissance qui peut être ajouté au milieu de culture pour favoriser la croissance et la prolifération des cellules.
7. Facteur de croissance des fibroblastes (FGF) : Le FGF est un facteur de croissance qui peut être ajouté au milieu de culture pour favoriser la croissance et la prolifération des cellules.
8. L-Glutamine : La L-Glutamine est un acide aminé essentiel à la croissance et à la prolifération des cellules. Elle peut être ajoutée au milieu de culture pour soutenir la croissance cellulaire.
9. Antibiotiques et antimycosiques: Des antibiotiques et des antimycosiques peuvent être ajoutés au milieu de culture pour prévenir la contamination bactérienne et fongique.

Le choix des suppléments dépend des besoins spécifiques du type de cellule et de l'application envisagée. Il est important d'optimiser la concentration des suppléments dans le milieu de culture pour obtenir une croissance et une fonction cellulaires optimales.

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Milieux de culture cellulaire différentiels

Un milieu de culture cellulaire différentiel est un type de milieu de croissance utilisé pour distinguer différents types de cellules en fonction de leur morphologie, de leur métabolisme ou d'autres caractéristiques. Il contient des composants spécifiques qui permettent la croissance de certains types de cellules tout en inhibant la croissance d'autres, et il contient souvent des indicateurs qui peuvent aider à identifier des types de cellules spécifiques.

Les milieux de culture cellulaire différentiels sont couramment utilisés en microbiologie pour identifier différentes souches bactériennes à partir d'une culture mixte. Cependant, ils peuvent également être utilisés en culture cellulaire pour identifier et étudier différents types de cellules sur la base de leurs caractéristiques spécifiques.

Par exemple, un milieu de culture cellulaire différentiel peut être utilisé pour distinguer les cellules cancéreuses des cellules normales. Le milieu peut contenir des composants spécifiques qui permettent la croissance des cellules cancéreuses tout en inhibant la croissance des cellules normales, ou vice versa. Le milieu peut également contenir des indicateurs qui peuvent aider à identifier le type de cellule spécifique, par des changements de pH ou de couleur.

Un autre exemple de milieu de culture cellulaire différentiel est l'utilisation d'un milieu à faible teneur en sérum ou sans sérum pour induire la différenciation de certains types de cellules. L'absence ou la réduction de sérum peut amener les cellules à se différencier en types cellulaires spécifiques, tels que les neurones ou les cellules musculaires.

Le choix d'un milieu de culture cellulaire différentiel approprié dépend des besoins spécifiques de la culture cellulaire et des caractéristiques des cellules étudiées. Il est important d'optimiser les composants et les conditions du milieu pour obtenir les résultats souhaités.

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Milieux de culture cellulaire sélectifs

Un milieu de culture cellulaire sélectif est un type de milieu de croissance qui contient des composants spécifiques permettant la croissance de certains types de cellules tout en inhibant la croissance d'autres. Pour ce faire, on ajoute au milieu des antibiotiques ou d'autres agents antimicrobiens qui ciblent et tuent certains types de micro-organismes.

Les milieux sélectifs sont couramment utilisés en microbiologie pour isoler et identifier des souches bactériennes spécifiques à partir d'une culture mixte. Cependant, ils peuvent également être utilisés en culture cellulaire pour sélectionner des types de cellules spécifiques ou pour éliminer des populations de cellules indésirables.

Par exemple, un milieu sélectif peut être utilisé pour cultiver un type de cellule spécifique dans une population mixte de cellules. Le milieu peut contenir des antibiotiques qui ciblent et tuent les autres types de cellules, ne laissant que le type de cellules désiré se développer et proliférer. Cela peut être utile pour l'isolement et l'expansion de types de cellules rares ou difficiles à cultiver.

Les milieux sélectifs peuvent également être utilisés pour éliminer les micro-organismes contaminants de la culture cellulaire. Par exemple, un milieu contenant un agent antimicrobien qui cible les bactéries peut être utilisé pour éliminer la contamination bactérienne d'une culture cellulaire.

Le choix d'un milieu sélectif approprié dépend des besoins spécifiques de la culture cellulaire et des micro-organismes à éliminer ou à sélectionner. Il est important d'optimiser la concentration des agents sélectifs afin d'éviter toute toxicité pour les cellules souhaitées.

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Techniques de culture cellulaire et meilleures pratiques

Voici quelques bonnes pratiques générales en matière de culture cellulaire :

1. Maintenir un environnement stérile : La culture cellulaire doit être réalisée dans un environnement stérile afin d'éviter la contamination des cellules. Utilisez une hotte à flux laminaire ou une armoire de biosécurité et stérilisez tous les équipements et matériels avant de les utiliser.
2. Respectez une bonne technique aseptique : Une bonne technique aseptique est essentielle pour prévenir la contamination. Portez un équipement de protection individuelle approprié, notamment des gants, une blouse et un masque, et évitez de toucher votre visage, vos cheveux ou tout objet non stérile lorsque vous manipulez des cellules ou des milieux.
3. Surveillez régulièrement la santé des cellules : Observez régulièrement la croissance, la morphologie et la viabilité des cellules pour vous assurer qu'elles sont saines et qu'elles se développent comme prévu. Si un problème est détecté, résolvez-le immédiatement.
4. Maintenir des conditions de culture optimales : Cultiver les cellules dans le milieu approprié, avec les suppléments et les nutriments adéquats, et dans les conditions de température, d'humidité et de gaz appropriées pour le type de cellule spécifique.
5. Utiliser les bonnes techniques de manipulation des milieux : Conservez les milieux à la température appropriée, évitez de congeler et de décongeler les milieux plusieurs fois et utilisez des techniques stériles lors de la préparation et de la manipulation des milieux.
6. Tenir des registres détaillés : Conservez un registre détaillé de vos protocoles de culture cellulaire, y compris les informations sur les lignées cellulaires, les conditions de culture et toute modification ou mesure de dépannage prise. Cela vous aidera à garantir la reproductibilité de vos résultats et facilitera le dépannage en cas de problème.
7. Utiliser des récipients de culture cellulaire appropriés et faire passer les cellules à la densité appropriée : Utilisez des récipients de culture cellulaire adaptés au type de cellule spécifique et faites passer les cellules à une densité appropriée afin d'éviter la surcroissance ou la surpopulation.

Le respect de ces bonnes pratiques contribuera à la réussite et à la reproductibilité des expériences de culture cellulaire.

Comment éviter la contamination par les mycoplasmes dans les cultures cellulaires

La contamination par les mycoplasmes est un problème courant dans les cultures cellulaires et peut avoir un impact significatif sur la croissance et le comportement des cellules cultivées. Voici quelques stratégies pour éviter la contamination par les mycoplasmes dans les cultures cellulaires :

1. Commencez par des cellules exemptes de mycoplasmes : Obtenez des cellules d'une source fiable et vérifiez qu'elles sont exemptes de mycoplasmes à l'aide d'un test basé sur la PCR ou d'une autre méthode appropriée.
2. Utiliser une technique stérile : Pratiquez une bonne technique aseptique lors de la manipulation des cellules, des milieux et de l'équipement. Utilisez une hotte à flux laminaire ou une enceinte de biosécurité et stérilisez tous les matériaux et équipements.
3. Utilisez des antibiotiques: Ajoutez des antibiotiques tels que la pénicilline-streptomycine aux milieux de culture cellulaire pour prévenir la contamination bactérienne, qui peut créer des conditions favorables à la croissance des mycoplasmes. Toutefois, il faut garder à l'esprit que les antibiotiques ne sont pas efficaces contre les mycoplasmes et qu'ils peuvent en fait masquer la contamination par ces derniers.
4. Contrôler régulièrement les cultures cellulaires : Vérifiez fréquemment les cultures pour détecter tout signe de contamination, comme des changements dans la morphologie cellulaire, le taux de croissance ou le pH. Tester régulièrement les cultures pour détecter une contamination par les mycoplasmes à l'aide d'un test basé sur la PCR ou d'une autre méthode appropriée.
5. Mettre en quarantaine les cultures contaminées : Si une contamination par des mycoplasmes est détectée, mettez immédiatement en quarantaine toutes les cultures contaminées et informez les autres membres du personnel du laboratoire afin d'éviter toute propagation de la contamination.
6. Décontaminez le laboratoire : Décontaminez le laboratoire, y compris l'ensemble du matériel, des surfaces et des solutions qui ont pu entrer en contact avec des cellules contaminées par des mycoplasmes. Il peut s'agir d'une désinfection à l'eau de Javel ou à l'aide d'autres agents appropriés.
7. Utiliser des méthodes de détection spécifiques aux mycoplasmes : Il existe une variété de méthodes pour détecter la contamination par les mycoplasmes dans les cultures cellulaires, y compris les tests basés sur la PCR, les tests basés sur la culture et la coloration fluorescente. Utilisez une méthode de détection adaptée à vos besoins spécifiques.

En mettant en œuvre ces stratégies, vous pouvez minimiser le risque de contamination par les mycoplasmes et maintenir des cultures cellulaires saines et fiables.

Comment préparer les milieux de culture cellulaire

La préparation des milieux de culture cellulaire comporte plusieurs étapes pour s'assurer que le milieu est stérile et qu'il contient les composants nécessaires à la croissance des cellules. Voici un protocole général de préparation des milieux de culture cellulaire :

1. Rassembler les ingrédients et l'équipement nécessaires : Avant de commencer, rassemblez tous les composants nécessaires, y compris le milieu de base, le sérum ou d'autres suppléments, les antibiotiques et d'autres additifs. Vous aurez également besoin d'une hotte stérile ou d'une enceinte à flux laminaire, de récipients stériles, d'un agitateur magnétique et d'un filtre stérile.
2. Stérilisez le matériel : Stérilisez tout le matériel et les récipients à l'aide d'un autoclave ou d'une autre méthode appropriée.
3. Mélangez les composants : Dans un récipient stérile, ajoutez le volume approprié de milieu de base, puis ajoutez tous les suppléments ou autres additifs nécessaires à votre expérience spécifique de culture cellulaire. Mélangez soigneusement les composants à l'aide d'un agitateur magnétique ou d'un shaker.
4. Stérilisez le milieu : Filtrez le milieu à l'aide d'un filtre de 0,22 µm pour éliminer toute bactérie ou autre contaminant. Il se peut que vous deviez filtrer le milieu plusieurs fois pour vous assurer qu'il est complètement stérile.
5. Conservez le milieu : Une fois le milieu stérilisé, il peut être stocké à la température appropriée jusqu'à ce qu'il soit prêt à être utilisé.

Il est important de maintenir des conditions stériles tout au long du processus afin d'éviter la contamination de la culture cellulaire. Il faut toujours travailler dans un environnement propre, porter un équipement de protection approprié et utiliser du matériel stérile lors de la manipulation des milieux de culture cellulaire et des cellules. En outre, il est important de suivre les instructions du fabricant pour le milieu de base spécifique et les suppléments que vous utilisez, car les protocoles de préparation peuvent varier d'un milieu à l'autre.

Comment changer de milieu de culture cellulaire

Le changement de milieu de culture cellulaire implique plusieurs étapes importantes pour s'assurer que les cellules ne sont pas endommagées ou contaminées au cours du processus. Voici un protocole général de changement de milieu de culture cellulaire :

1. Rassembler le matériel nécessaire : Avant de commencer, rassemblez tout le matériel nécessaire, y compris des milieux stériles, des pipettes stériles ou une pipette sérologique stérile, un filtre stérile, un conteneur à déchets et des gants.
2. Préparez le milieu stérile : Réchauffez le nouveau milieu de culture cellulaire à température ambiante et stérilisez-le en le passant à travers un filtre de 0,22 µm pour éliminer toute bactérie ou autre contaminant.
3. Préparer les cellules pour le changement de milieu : Retirer l'ancien milieu de la boîte de culture cellulaire, de la fiole ou du puits, et rincer doucement les cellules avec du PBS stérile ou un autre tampon pour éliminer tout résidu de milieu ou de débris.
4. Ajouter le nouveau milieu : À l'aide d'une pipette stérile ou d'une pipette sérologique, ajouter le volume approprié du nouveau milieu dans le récipient de culture cellulaire. Veiller à ne pas perturber la monocouche cellulaire et à ne pas introduire de bulles d'air.
5. Éliminer les anciens milieux : Collecter les anciens milieux dans un conteneur à déchets en vue d'une élimination appropriée.
6. Remettre les cellules dans l'incubateur : Une fois le nouveau milieu ajouté, replacez le récipient de culture cellulaire dans l'incubateur et laissez les cellules se développer dans les conditions appropriées.

Il est important de maintenir des conditions stériles tout au long du processus afin d'éviter la contamination de la culture cellulaire. Travaillez toujours dans un environnement propre, portez un équipement de protection approprié et utilisez du matériel stérile lorsque vous manipulez des milieux de culture cellulaire et des cellules.

Quel est le milieu de culture cellulaire le plus populaire ?

Il existe plusieurs formules de milieux de culture cellulaire populaires qui sont largement utilisées dans les laboratoires de recherche et les entreprises de biotechnologie.

Le milieu de culture cellulaire le plus populaire dépend du type de cellule spécifique cultivé et des exigences expérimentales, mais certaines des formulations les plus couramment utilisées comprennent le milieu Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), le Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640, le milieu minimum essentiel (MEM), le milieu Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM), et le mélange d'éléments nutritifs Ham's F-12 et le milieu F-10.

Le choix du milieu dépend du type de cellules à cultiver, des exigences expérimentales et de la disponibilité des suppléments et autres additifs éventuellement nécessaires.

Quelle est la fréquence de remplacement des milieux de culture cellulaire ?

La fréquence à laquelle vous devez remplacer le milieu de culture cellulaire dépend de plusieurs facteurs, y compris le type de cellules que vous cultivez, les conditions de culture et le but de votre expérience. En général, il est recommandé de remplacer le milieu de culture cellulaire au moins une fois tous les 2 à 3 jours afin de maintenir des conditions de croissance optimales pour les cellules.

La fréquence de remplacement du milieu peut varier en fonction du type de cellule et des conditions de culture. Par exemple, certains types de cellules peuvent nécessiter des changements de milieu quotidiens pour maintenir une croissance optimale, tandis que d'autres peuvent tolérer des changements de milieu moins fréquents. En outre, si vous cultivez des cellules dans un milieu sans sérum ou à faible teneur en sérum, vous devrez peut-être remplacer le milieu plus fréquemment pour éviter l'épuisement des nutriments.

Il est important de contrôler régulièrement le pH et l'osmolalité du milieu de culture cellulaire pour s'assurer que les conditions de croissance restent optimales. Si le pH descend en dessous de la plage recommandée, il peut être nécessaire de remplacer le milieu plus fréquemment.

En résumé, la fréquence de remplacement des milieux dépend de plusieurs facteurs, notamment du type de cellules, des conditions de culture et des exigences expérimentales. En règle générale, il est recommandé de remplacer le milieu au moins une fois tous les 2 à 3 jours pour maintenir des conditions de croissance cellulaire optimales.

Quels sont les composants d'un milieu de culture cellulaire ?

Les composants d'un milieu de culture cellulaire peuvent varier en fonction du type de cellules cultivées et des conditions expérimentales. Toutefois, un milieu de culture cellulaire typique contient un mélange équilibré de nutriments, de facteurs de croissance, d'acides aminés, de vitamines et de minéraux, et peut également contenir des antibiotiques ou d'autres additifs pour favoriser la croissance des cellules et prévenir la contamination. Voici quelques-uns des principaux composants d'un milieu de culture cellulaire typique :

1. Sels de base : Les milieux de culture cellulaire contiennent généralement un mélange de sels inorganiques, tels que le sodium, le potassium, le calcium, le magnésium et le chlorure, qui fournissent des ions essentiels à la croissance et au métabolisme des cellules.
2. Sources d'énergie : Les milieux de culture cellulaire contiennent généralement une source de glucose, comme le D-glucose, qui constitue la principale source d'énergie pour les cellules. Certains types de cellules peuvent également nécessiter des sources d'énergie supplémentaires, telles que des acides aminés ou des acides gras.
3. Acides aminés : les milieux de culture cellulaire contiennent un mélange d'acides aminés essentiels et non essentiels, qui sont nécessaires à la synthèse des protéines et à la croissance des cellules.
4. Vitamines : Les milieux de culture cellulaire contiennent généralement une série de vitamines, dont la vitamine B12, l'acide folique et la biotine, qui sont essentielles à de nombreux processus cellulaires.
5. Facteurs de croissance : Les milieux de culture cellulaire peuvent contenir des facteurs de croissance spécifiques, tels que le facteur de croissance épidermique (EGF) ou le facteur de croissance des fibroblastes (FGF), qui peuvent stimuler la croissance et la prolifération de types de cellules spécifiques.
6. Hormones : Certains milieux de culture cellulaire peuvent contenir des hormones, telles que l'insuline, qui peuvent favoriser la croissance et la différenciation des cellules.
7. Sérum : De nombreux milieux de culture cellulaire contiennent du sérum, qui est dérivé du sang animal et contient un mélange complexe de facteurs de croissance, d'hormones et d'autres nutriments qui peuvent favoriser la croissance et la différenciation des cellules.
8. Antibiotiques et antimycosiques : Les milieux de culture cellulaire peuvent contenir des antibiotiques ou des antimycosiques, tels que la pénicilline-streptomycine ou l'amphotéricine B, qui peuvent aider à prévenir les contaminations bactériennes, fongiques et autres.
9. Tampons : Les milieux de culture cellulaire contiennent des tampons, tels que l'HEPES ou le bicarbonate, qui contribuent à maintenir le pH du milieu dans une fourchette étroite et à stabiliser le milieu contre les changements d'acidité.

En résumé, un milieu de culture cellulaire typique contient un mélange complexe de nutriments, de facteurs de croissance, d'acides aminés, de vitamines et de minéraux, ainsi que d'autres additifs, qui sont conçus pour favoriser la croissance et la prolifération de types spécifiques de cellules

Que signifie un changement de couleur dans un milieu de culture cellulaire ?

Un changement de couleur dans un milieu de culture cellulaire peut indiquer plusieurs choses en fonction du contexte et du type de milieu utilisé. Voici quelques possibilités :

1. Changement de pH : Certains milieux de culture cellulaire contiennent des indicateurs de pH qui changent de couleur lorsque le pH du milieu change. Si le milieu change de couleur, cela peut signifier que le pH du milieu a changé, ce qui peut indiquer un problème au niveau des conditions de culture ou du milieu lui-même.
2. Contamination : Si le milieu change de couleur et devient trouble ou turbide, cela peut être le signe d'une contamination bactérienne ou fongique. Dans ce cas, le changement de couleur peut s'accompagner d'un changement d'odeur ou de l'apparition de colonies visibles dans le milieu.
3. Réaction chimique : Certains composants des milieux de culture cellulaire peuvent subir des réactions chimiques qui les font changer de couleur. Par exemple, le rouge de phénol contenu dans certains milieux peut réagir avec des composés produits par les cellules elles-mêmes, ce qui entraîne un changement de couleur.
4. Épuisement des nutriments : Si les cellules de la culture se développent et se divisent activement, elles consomment les nutriments du milieu. Avec le temps, le milieu peut changer de couleur en raison de l'épuisement des nutriments.

Il est important de noter qu'un changement de couleur n'est pas toujours le signe d'un problème. Cependant, c'est un signe que quelque chose a changé dans la culture ou dans le milieu et qu'il faut poursuivre les investigations pour s'assurer que les cellules sont saines et se développent correctement.

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Combien de temps les milieux de culture cellulaire se conservent-ils ?

La durée de conservation des milieux de culture cellulaire dépend de plusieurs facteurs, notamment de la composition du milieu, des conditions de conservation et de l'utilisation prévue du milieu. En général, les milieux de culture cellulaire peuvent être conservés pendant plusieurs semaines à plusieurs mois avant de devoir être remplacés. Il est toutefois important de suivre les recommandations du fabricant et de surveiller le milieu pour déceler tout signe de détérioration.

La composition du milieu peut affecter sa stabilité et sa durée de conservation. Par exemple, les milieux contenant du sérum ou d'autres composants d'origine animale peuvent avoir une durée de conservation plus courte que les milieux sans sérum, car ces composants peuvent se dégrader avec le temps et constituer une source potentielle de contamination.

Les conditions de stockage peuvent également affecter la stabilité du milieu. Les milieux de culture cellulaire doivent être conservés à une température et à un niveau d'humidité appropriés pour éviter l'évaporation, la contamination ou la détérioration. Il est recommandé de conserver les milieux entre 2 et 8 °C, à l'abri de la lumière, et d'éviter les cycles de congélation et de décongélation, qui peuvent affecter les performances du milieu.

Il est également important de surveiller le milieu pour détecter les signes de détérioration, tels que les changements de pH, de couleur ou de clarté, ou la présence d'une croissance microbienne. Les milieux qui présentent des signes de détérioration doivent être jetés et remplacés par du matériel frais.

En résumé, la durée de conservation des milieux de culture cellulaire peut varier en fonction de la composition du milieu, des conditions de stockage et de l'utilisation prévue du milieu. Il est important de suivre les recommandations du fabricant et de surveiller les signes de détérioration du milieu pour garantir des performances optimales et la reproductibilité des expériences de culture cellulaire.